10-12周齡雌性大鼠卵巢顆粒細胞的原代培養(yǎng)

1. 10-12周齡雌性SD大鼠，皮下注射孕馬血清促性腺激素（Pregnant Mare Serum Gonadotropin，PMSG） 60IU，48h后頸椎脫臼處死。

2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘，轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。

3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉，可見白色的脂肪組織，拉出脂肪組織，可見到粉紅色的卵巢，摘除卵巢。

4. 取卵巢放入預(yù)冷的含雙抗的緩沖液中，用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜。

5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡，釋放顆粒細胞。

6. 將懸液通過70μm篩網(wǎng)過濾至50ml離心管中，之后200g，離心7min。

7. 計數(shù)，種植到24孔板和大皿中。

8. FSHR表達鑒定顆粒細胞。